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IRF1 ELISA定量試劑盒效果不佳的原因是什么？
點擊次數：1449 更新時間：2018-12-27
IRF1 ELISA定量試劑盒效果不佳的原因是什么？
在使用IRF1 ELISA定量試劑盒做實驗的時候，有些細節若是做不好會出現實驗異常，或者效果不佳，那么你有想過是什么原因嗎？
一·白板異常：顯色步驟結束后，酶標板所有孔均無顏色。陽性對照不顯色。
這可能是因為：
1. 試劑已過效期，或不同試劑盒組分混用（解決方式：檢查試劑的組分及批號，確認未過期以及所有組分均屬對應的試劑盒。不同試劑盒或不同批號的試劑不能混用）。
2. 錯加、漏加試劑底物、顯色劑 A或B（解決方式：嚴格按說明書的步驟操作，加完試劑后可觀察一下液面高度是否一致，以減少漏加現象）。
3. 洗板及加樣過程中，酶標受污染失活失去催化顯色劑顯色的能力（解決方式：確認盛酶標的容器不含酶抑制劑如疊氮鈉等，確認配制洗液的容器已洗干凈）。
4. 終止液誤作洗滌液稀釋或當底物緩沖液配制（解決方式：每次配制時都應看清標簽標明物質）。
5. 蒸餾水有問題（解決方式：確認配制洗液的純化水達到要求且未污染，與好蒸餾水比較）。
二·顯色弱、靈敏度低：實驗結束后，包括陽性對照、質控在內的所有板孔顏色均較淡。
這可能是因為：試劑盒超過期， 超過有效期的產品可能會產生很弱的信號；試劑盒沒有按規定進行保存，受高溫影響（實驗前檢查試劑的組分及批號，確認試劑未過期。不要將試劑盒長時間置于常溫下，按使用規定儲藏）。
1. 試劑、樣品用前未平衡至室溫。如何解決？從低溫冰箱中取出的試劑及樣品應置室溫平衡 20分鐘左右。
2. 加入試劑的體積和時間有誤，移液器計量不準，吸嘴內水分太多或不清潔。如何解決？確定所使用的試劑體積正確，加入時間適當。 校正移液器，移液器與吸嘴配合要緊密吻合。移液不宜太快，排放應*。
3. IRF1 ELISA定量試劑盒洗板及加樣過程中，酶標受污染失活而失去催化顯色劑顯色的能力。如何解決？確認盛酶標的容器不含酶抑制劑如疊氮鈉等，確認配制洗液的容器已洗干凈，確認配制洗液的純化水達到要求且未受污染。
4. 孵育時間及孵育溫度未達到要求 ，反應板放入培養箱時注意溫度并及時調整。如何解決？孵育溫度應控制在 37-38℃，孵育時間嚴格按照說明書操作。 保溫期內不宜多開門，以免影響保溫。
5. 洗板次數過多，或濃縮洗液稀釋倍數不符合要求；洗滌沖擊力太大。浸泡時間太長。如何解決？嚴格按說明書要求稀釋濃縮洗液及洗板，減小洗滌沖擊力，按說明書要求置留洗滌液時間和洗滌次數。
6. 顯色劑加量不足或順序顛倒，或混合后加入。如何解決？顯色劑滴瓶垂直向下，持力均勻，滴速不宜過快，先加顯色劑 A，后加顯色劑B，不可將A、B液混合后加入
7. 底物作用時間不夠。如何解決？準確定時。
8. 蒸餾水水質有問題。如何解決？測定蒸餾水配制試劑對酶免疫法的影響。
三·IRF1 ELISA定量試劑盒實驗結束后，陰陽性對照正常，質控正常，但臨床標本感覺顯色較弱
1. 待測標本中可能不含強陽性標本，故結果可能是正常的（解決方式：如有懷疑，可復檢）。
2. 標本加入疊氮鈉作為防腐劑（解決方式：酶免實驗中的標本禁用疊氮鈉作為防腐劑，可選用 proclin、硫柳汞等其他防腐劑）。
四·陰陽性對照正常，但質控、參考品或個別弱陽性標本未能檢出。
1. 未達要求的孵育溫度及孵育時間可檢出強陽性標本，但質控或弱陽性標本受 溫度變化影響較大而被未檢出（解決方式：質控品或標本避免反復凍融。標本在一周內使用的，可存于 2-8℃，如需保存，應置于-20℃以下保存。質控品應小量分裝，并置于-20℃以下保存）。
2. 質控品或標本高溫放置過久，或被反復凍融致待測物滴度下降，而未能檢出（解決方式：重新設定酶標儀的參數，特別是檢查濾光片是否匹配）。
3. IRF1 ELISA定量試劑盒儀器設定不正確，濾光片不匹配（解決方式：重新設定酶標儀的參數，特別是檢查濾光片是否匹配）。
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