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細胞簡介：

結腸在右髂窩內續(xù)于盲腸，在第 3骶椎平面連接直腸。結腸分升結腸、橫結腸、降結腸和乙狀結腸4部，大部分固定于腹后壁，結腸的排列酷似英文字母M，將小腸包圍在內。結腸橫切面由內到外依次為：粘膜（上皮層，固有層，粘膜肌層），粘膜下層，肌層，外膜。

結腸黏膜上皮在環(huán)境或遺傳等多種致癌因素作用下導致結腸癌，是常見的惡性腫瘤之一。因此，體外培養(yǎng)結腸黏膜上皮細胞為研究進一步結腸癌等提供了前提和基礎。

細胞特性：

1） 細胞來源于人正常結腸組織。

2) 細胞鑒定：PCK熒光染色為陽性。

3) 經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。

4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5) 細胞生長方式：多角形，鋪路石樣細胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 delf 原代上皮細胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠αL艾杜糖苷酸酶(IDUA)ELISA 試劑盒

Rat aquaporin 5 (AQP-5) ELISA Kit 大鼠水通道蛋白5(AQP-5)檢測試劑盒

Humanplacealribonucleaseinhibitor,HPRIELISAKit 人胎盤核糖核酸抑止劑(HPRI)檢測試劑盒 進口分裝

HumanCiliaryNeuroophicFactor,CF檢測試劑盒人睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(CF)檢測試劑盒

組(leucine)含量高效液相色譜法定量檢測試劑盒20次

humanS100calciumbindingproteinA8/calgranulinA,S100A8ELISAKit人S100鈣結合蛋白A8/鈣粒蛋白A(S100A8)檢測試劑盒

KLRC1重組小鼠 NKG2A / NKG2 / CD159A / KLRC1 蛋白 (His 標簽) Protein

踝蛋白(TLN)重組蛋白 Recombinant Talin (TLN)

CBR3重組人 CBR3 / HCBR3 / Carbonyl Reductase 3 蛋白 (His 標簽) Protein

ACVR1B Protein Human 重組人 ALK4 / ACVR1B 蛋白 (His & Fc 標簽)

NRG1 Protein Canine 重組狗 NRG1-alpha 蛋白 (ECD, His 標簽)

踝蛋白(TLN)重組蛋白 Recombinant Talin (TLN)

ACVR1B Protein Human 重組人 ALK4 / ACVR1B 蛋白 (His & Fc 標簽)

KLRC1重組小鼠 NKG2A / NKG2 / CD159A / KLRC1 蛋白 (His 標簽) Protein

NRG1 Protein Canine 重組狗 NRG1-alpha 蛋白 (ECD, His 標簽)

CBR3重組人 CBR3 / HCBR3 / Carbonyl Reductase 3 蛋白 (His 標簽) Protein

植物滲調蛋白(Osmotins)檢測試劑盒

Human ai glucoprotein 210 (gp210) ELISA Kit 人抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)檢測試劑盒

PorcineInsulin,INSELISAKit 豬胰島素(INS)檢測試劑盒 進口分裝

CLIAKitforaFGF-1ELISAKit大鼠酸性成纖維細胞生長因子1

血液血管緊張素Ⅰ轉化酶2(ACE2)活性比色法定量檢測試劑盒20次

Mousetarate-resistaacidphosphatase5b,ACP-5bELISAKit小鼠抗酸性0酸酶5b(ACP-5b)檢測試劑盒

人結腸上皮細胞脂肪酸合成酶（FAS）測試盒   紫外分光光度法   50管/48樣

蔗糖0酸化酶(SP)測試盒   紫外分光光度法   50管/48樣

硫氧還蛋白氧化還原酶（xR）測試盒   可見分光光度法   50管/48樣

還原酶（GR）測試盒   紫外分光光度法   50管/48樣

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。