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細(xì)胞簡介：

喉為氣管前段的膨大部分，既是呼吸的通道，也是發(fā)音器官。喉由軟骨、韌帶、肌肉與粘膜構(gòu)成，其中粘膜上皮是粘膜層的重要組成部分。

細(xì)胞特性：

1）細(xì)胞來源于術(shù)后的喉黏膜組織。

2)細(xì)胞鑒定：廣譜角蛋白（PCK）熒光染色為陽性。

3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5)細(xì)胞生長方式：上皮樣，多角形細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 delf 原代上皮細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠封閉蛋白3(CLDN3)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： CLDN3 ELISA Kit

Rat beta endorphin (beta -EP) ELISA Kit 大鼠β內(nèi)啡肽(β-EP)檢測(cè)試劑盒

Ratsolublereceptoractivatorofnuclearfactor-kBligand,sRANKLELISAKit 大鼠可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforDR-70TM(HumaumormarkerDR-70forlungcancer)ELISAKit人肺癌標(biāo)志物DR-70

細(xì)胞皮爾斯(PERLS-DAB)非血紅素鐵(三價(jià))強(qiáng)化染色試劑盒

RatHighdensitylipoprotein,HDLELISAKit大鼠高密度脂蛋白(HDL)檢測(cè)試劑盒

ASAH2重組小鼠 ASAH2 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

Cholesterol 膽 100gCholesterol 膽

PAK3重組人 PAK3 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

ACO1 Protein Human 重組人 ACO1 / irp1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

KIRREL Protein Mouse 重組小鼠 KIRREL1 / NEPH1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

Cholesterol 膽 100gCholesterol 膽

ACO1 Protein Human 重組人 ACO1 / irp1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

ASAH2重組小鼠 ASAH2 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

KIRREL Protein Mouse 重組小鼠 KIRREL1 / NEPH1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

PAK3重組人 PAK3 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

植物赤(GA)ELISA 試劑盒

Human ai cyclic ciullinated peptide aibody (CCP) ELISA Kit 人抗環(huán)胍肽抗體(CCP)檢測(cè)試劑盒

PorcineCompleme3,C3ELISAKit 豬補(bǔ)體蛋白3(C3)檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口分裝

ADVIgMVII腺病毒IgMⅦ型(間接法二步法)

血液(NO)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒50次

MouseSolubleprotein-100,S-100ELISAKit小鼠S100蛋白(S-100)檢測(cè)試劑盒

人喉黏膜上皮細(xì)胞載脂蛋白E   英文名稱：   apolipoprotein/apoprotein E   規(guī)格：      英文縮寫：   APOE

載脂蛋白P   英文名稱：   Apolipoprotein P   規(guī)格：      英文縮寫：   ApoP

血管生成素相關(guān)生長因子   英文名稱：   Angiopoietin Growth Factors   規(guī)格：      英文縮寫：   AGF

血管生成素-2   英文名稱：   Angiopoietin-2   規(guī)格：      英文縮寫：   ANG2

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。