產品名稱：重組大鼠表皮生長因子（EGF）
產品特點：重組大鼠表皮生長因子（EGF）的相關產品：F1 operon positive regulatory protein(NT 0.5mgF1 operon positive regulatory protein(NT) 鼠疫耶爾森氏菌F1莢膜蛋白(N端多肽)ALDH4A1 Protein Human 重組人 ALDH4A1 蛋白 (His & GST 標簽)
產品型號：
更新日期：2024-11-19
訪問次數：851
重組大鼠表皮生長因子（EGF）的詳細資料：
產品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：
產品英文名稱：Rat EGF protein
產品中文名稱：重組大鼠表皮生長因子（EGF）
規(guī)格：20 μg/500 μg/100 μg/1 mg
貨號：EY-01X8641
用途：僅供科研研究實驗
特點&優(yōu)勢:
標簽:無標簽
表達宿主:大腸桿菌
種屬:大鼠
序列:氨基酸序列來源于： 大鼠 EGF (P07522)(Asn974-Arg1026) 表達的蛋白片段。
活性:通過其在Balb/3T3細胞中誘導增殖的能力來測定。該效應的ED50為0.1098 ng/mL。
蛋白長度：重組大鼠EGF由53個氨基酸組成，預測分子量為6.3 kDa。 在還原條件下，SDS-PAGE中大鼠EGF蛋白的表觀分子量約為6.3 kDa。
純度:≥ 98 % ，使用SDS-PAGE檢測
采用 LAL 法檢測，每 1 μg 蛋白質中的 E動?動
背景
EGF是單通道I型膜蛋白，包含8個低密度脂蛋白受體的B類重復序列:和9個EGF樣結構域。 EGF是一種生長因子，可在體內和體外刺激各種表皮和上皮組織以及細胞培養(yǎng)物中某些成纖維細胞的生長。 它可以刺激細胞增殖，分化和存活。此外，有研究發(fā)現，EGF具有抑制胃液分泌的功能，并在傷口愈合中具有重要作用。 EGF還可以通過一個稱為c-erbB的I類激酶受體發(fā)出信號， 該受體可以與TGF-α和VGF（痘苗病毒生長因子）結合。
本產品具有下列特點:
1.操作簡便、快捷。可直接加入到檢測平板。在96-孔板中檢測時,無需洗滌或收獲細胞,免去溶解步驟。
2. 無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。
3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機溶劑來溶解甲臜產物。
4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進一步生成。
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操作步驟：
(一)獲得目的基因
1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質粒為模板,按基因序列設計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。
2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉錄形成cDNA第一鏈,以逆轉錄產物為模板進行PCR循環(huán)獲得產物。
(二)構建重組表達載體
1、載體酶切:將表達質粒用限制性內切酶(同引物的酶切位點)進行雙酶切,酶切產物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。
2、PCR產物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。
(三) 獲得含重組表達質粒的表達菌種
1、 將連接產物轉化大腸桿菌DH5α,根據重組載體的標志(抗Amp或藍白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質粒,雙酶切初步鑒定。
2、 測序驗證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進入下步操作。否則應篩選更多克隆,重復亞克隆或亞克隆至不同酶切位點。
3、 以此重組質粒DNA轉化表達宿主菌的感受態(tài)細胞。
(四)誘導表達
1、挑取含重組質粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養(yǎng)。
2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。
3、取部分液體作為未誘導的對照組,余下的加入IPTG誘導劑至終濃度0.4mM作為實驗組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。
4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。
5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。
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