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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體分離自腦皮層組織；大腦分左右兩個(gè)半球，大腦皮質(zhì)（灰質(zhì)）覆蓋著每個(gè)大腦半球的大部分，它是神經(jīng)元胞體集中的地方。內(nèi)部則是由神經(jīng)纖維或髓鞘構(gòu)成的白質(zhì)。少突膠質(zhì)細(xì)胞分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，在銀浸染標(biāo)本中，少突膠質(zhì)細(xì)胞比星狀膠質(zhì)細(xì)胞小，其突起也較小而少，呈珠狀，故被稱(chēng)為少突膠質(zhì)細(xì)胞或寡突膠質(zhì)細(xì)胞。少突膠質(zhì)細(xì)胞（oligodendrocyte）是中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS）的成髓鞘神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，其發(fā)育要經(jīng)歷少突膠質(zhì)細(xì)胞祖細(xì)胞、前少突膠質(zhì)細(xì)胞祖細(xì)胞、未成熟和成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞等階段。有學(xué)者將少突膠質(zhì)細(xì)胞按其發(fā)育程度和形態(tài)分為三型。但是，細(xì)胞發(fā)育是一個(gè)連續(xù)的過(guò)程，其形態(tài)、表達(dá)產(chǎn)物和功能的演變沒(méi)有嚴(yán)格的界限，因此，其分類(lèi)是相對(duì)的。這三型分別為：Ⅰ型少突膠質(zhì)細(xì)胞又稱(chēng)前O2A（pre-O2A progenitor cell）。細(xì)胞呈圓形，表面光滑，直徑約3μm，體外混合培養(yǎng)時(shí)成簇生長(zhǎng)在星形膠質(zhì)表面，具有很強(qiáng)的分裂增殖潛力，表達(dá)GM1、波形蛋白和多唾液酸—神經(jīng)粘附分子（polysialic acid-neural cell adhesion molecule，PSA-NCAM）等。Ⅱ型少突膠質(zhì)細(xì)胞胞體常有雙極或三極突起，極少數(shù)為單極突起，直徑約7μm，有一定的分裂增殖能力。體外培養(yǎng)時(shí)為雙潛能細(xì)胞，既可分化為少突膠質(zhì)細(xì)胞又可分化為Ⅱ型星形膠質(zhì)，故又稱(chēng)為少突膠質(zhì)細(xì)胞-Ⅱ型星形膠質(zhì)祖細(xì)胞（oligodendrocyte-type-2 astrocyte progenitor cell，O2A）。O2A除表達(dá)GM1和波形蛋白外還表達(dá)GD3和GQ（淋巴雜交瘤株A2B5產(chǎn)生GQ的抗體），故常用A2B5抗體標(biāo)記O2A。Ⅲ型少突膠質(zhì)細(xì)胞不再具有分裂增殖能力，為分裂終期細(xì)胞。直徑約10μm。根據(jù)其形成髓鞘的能力，又分為不成熟的和成熟的兩類(lèi)少突膠質(zhì)細(xì)胞。不成熟的OL胞體常伸出4～5條較粗大突起，表面還殘留有A2B5標(biāo)記物，同時(shí)也表達(dá)O1-O4抗原，無(wú)形成髓鞘的能力。成熟的少突膠質(zhì)細(xì)胞突起有如蜘蛛網(wǎng)，大量表達(dá)半乳糖腦苷脂（galactocerebro side，GC）、蛋白脂蛋白（proteio lipid protein，PLP）、髓鞘堿性蛋白（myelin basic protein，MBP）等，有對(duì)軸突髓鞘化的能力。體外培養(yǎng)的少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞（簡(jiǎn)稱(chēng)少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞）包括前O2A和O2A和未成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞，前兩者具有增殖能力。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)采用消化、混合細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)缺失培養(yǎng)、搖床振蕩結(jié)合差速貼壁法并通過(guò)專(zhuān)用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體經(jīng)A2B5免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含B-27、PDGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次；

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 雙極、多極形

傳代特性 不傳代，不增殖，存活1-2周

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠頂體蛋白(ACR)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： ACR ELISA Kit

Porcine growth hormone releasing peptide GHR 豬生長(zhǎng)激素釋放肽ghr

木瓜特定基因序列(Papaya)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?span>) 48T

CLIAKitforLTB4(HumanLeukoieneB4)ELISAKit人白三烯B4

體液組織蛋白酶B(CATHEPSINB)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒20次

ELISAKitHsp-60雞熱休克蛋白60

REG4重組小鼠 REG4 / GISP / RELP 蛋白 Protein

AMACR/P504S(alpha-methylacyl-CoA racemase 0.5mgAMACR/P504S(alpha-methylacyl-CoA racemase) α-甲基酰基消旋酶抗原

IL36A重組人 IL1F6 / IL36 蛋白 (aa 6-158) Protein

CD276 Protein Human 重組人 B7-H3 / CD276 蛋白

TNFSF15 Protein Rat 重組大鼠 TNFSF15 / TL1A 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

AMACR/P504S(alpha-methylacyl-CoA racemase 0.5mgAMACR/P504S(alpha-methylacyl-CoA racemase) α-甲基酰基消旋酶抗原

CD276 Protein Human 重組人 B7-H3 / CD276 蛋白

REG4重組小鼠 REG4 / GISP / RELP 蛋白 Protein

TNFSF15 Protein Rat 重組大鼠 TNFSF15 / TL1A 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

IL36A重組人 IL1F6 / IL36 蛋白 (aa 6-158) Protein

小鼠血小板因子3(PF-3)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human soluble ansferrin receptor (sTfR) ELISA Kit 人可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(sTfR)檢測(cè)試劑盒

Human5-Nucleotidase,5-ELISAKit 人5核苷酸酶(5-)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

(pIKBAlpha)ELISAKit大鼠0酸化核因子κB抑制蛋白α

飲料糖精(saccharin)含量紅外光譜法定量檢測(cè)試劑盒20次

Mouseisletcellaibody,ICAELISAKit小鼠胰島細(xì)胞抗體(ICA)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞小鼠脂蛋白脂酶(LPL)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠抗酸性0酸酶5b(ACP-5b)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

中文名稱(chēng)   方法   規(guī)格

小鼠葡萄糖依賴(lài)性胰島素釋放多肽(GIP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶(hù)自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶(hù)用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶(hù)收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪(fǎng)直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。