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細胞簡介：

人關節韌帶成纖維分離自關節韌帶組織；韌帶是纖維結締組織，將各個骨頭在關節處連接起來，并在關節活動時加固關節穩定關節。其中顳下頜關節、踝關 節、膝關節韌帶組織研究較多，顳下頜關節兩側各有三條，即顳下頜韌帶、莖突下頜韌帶和蝶下頜韌帶。踝關節周圍韌帶根據其解剖位置可以分成3組，外側韌帶 ，內側三角韌帶，脛腓聯合韌帶。膝關節的韌帶有囊外韌帶和囊內韌帶,其共同作用為加強關節的穩定性。囊外韌帶主要有:髕韌帶位于髕骨的下部，關節囊的前 方,是股四頭肌肌腱的延續,向下附著于脛骨粗隆，兩側有側副韌帶加強；囊內韌帶:主要為交叉韌帶:前交叉韌帶附著于脛骨髁間隆起前份和股骨外側髁的內側面 ，防止脛骨過度前移;后交叉韌帶附著于脛骨髁間隆起后份與股骨內側髁的外側面，防止脛骨過度后移。另外，在膝關節內尚有膝橫韌帶。任何關節韌帶均可由于 外傷而發生損傷，但影響較大又較常見的是膝關節韌帶損傷和踝關節韌帶損傷。膝關節韌帶損傷，常見者為膝關節側副韌帶損傷。多因膝關節微屈時，突然受到 內翻或外翻的沖擊力所致。踝關節韌帶損傷。多因行走或跑跳時誤入不平之處所致。以外側損傷多見。韌帶是致密纖維結締組織，主要特點是細胞、基質成分少 ，纖維非常多、纖維粗大排列緊密，且排列方向與承受張力的方向一致，有很強的保護和支持作用。韌帶主要包含韌帶成纖維細胞。人關節韌帶成纖維對研究關節韌帶損傷有重要意義。

方法簡介：

實驗室分離的人關節韌帶成纖維采用 - 膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

實驗室分離的人關節韌帶成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息：

培養基：基礎培養基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

人關節韌帶成纖維體外培養周期有限；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的佳培養狀態。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產品：

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小鼠透明質酸(HA)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現象。觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養基重懸細胞，并接種到新的培養瓶或培養皿中，置于培養箱中進行培養。

5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。