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產品名稱：人結腸黏膜上皮細胞

英文名稱：Human Colonic Mucosal Epithelial Cells

組織來源：結腸組織

產品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶

人結腸黏膜上皮分離自結腸組織；結腸在右髂窩內續于盲腸，在第3骶椎平面連接直腸。結腸分升結腸、橫結腸、降結腸和乙狀結腸4部分，大部分固定于腹后壁，結腸的排列酷似英文字母“M"，將小腸包圍在內。結腸橫切面由內到外依次為：黏膜（上皮層、固有層、黏膜肌層），黏膜下層（疏松結締組織），肌層（內環形、外縱行兩層平滑肌），外膜（纖維膜或漿膜）。腸黏膜上皮細胞是機體內外環境的重要屏障，持續暴露于大量抗原中，也是機體面對病原微生物的道防線。因此，腸黏膜上皮細胞除有吸收、分泌和轉運等重要生理功能之外，在黏膜先天性和獲得性免疫防御機制中也起著重要作用。腸黏膜上皮細胞作為先接觸抗原的細胞，在黏膜免疫反應的起始階段發揮關鍵作用，它決定黏膜免疫反應的發生、性質和強度。探討正常結腸黏膜上皮細胞的分離、體外培養方法，為研究腸黏膜上皮細胞以及與腸黏膜相關疾病建立合適的細胞模型。

公司實驗室分離的人結腸黏膜上皮采用先機械分離法、后膠原酶消化法并通過上皮細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的人結腸黏膜上皮經Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 上皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

視天氣狀況和運輸距離遠近,公司與客戶協商后選擇下述方式中的一種進行。

1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養,如無法立刻進行復蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。

T-25培養瓶充滿培養基后進行常溫運輸;收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態,如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作,如懸浮的細胞較多,請將培養瓶至于培養箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。

① 組織塊培養法

組織塊培養是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養瓶(或皿)中，瓶壁可預先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。

② 消化培養法

③ 懸浮細胞培養法

對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養，或經淋巴細胞分層液分離后接種培養。

④器官培養

器官培養是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環境條件下培養，器官培養可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯系、排列情況和相互影響，以及局部環境的生物調節作用。

本公司的所有產品僅用于科學研究或者工業科研等非醫療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

取材→分離→培養和維持

1、取材

人和動物細胞的取材是原代細胞培養成功的首要條件，直接影響細胞的體外培養。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應嚴格無菌

③ 防止機械損傷

④ 去除無用組織和避免干燥

⑤ 應注意組織類型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動物體內(或胚胎組織)由于多種細胞結合緊密，不利于各個細胞在體外培養中生長繁殖，必須將現有的組織塊充分散開，使細胞解離出來。

(1)懸浮細胞的分離方法

組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據需要收獲目的細胞。

(2)實體組織材料的分離方法

對于實體組織材料，由于細胞間結合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機械分散法

特點:簡便、快速,但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團塊(或糊狀)，應用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構松動，使團塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時再采用機械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細胞團塊得以較充分的分散，制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液，接種培養后，細胞容易貼壁生長。

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