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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

人外周血淋巴分離自外周血；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細胞，我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞，在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念。淋巴細胞（lymphocyte）是白細胞的一種，是體積小的白細胞。其由淋巴器官產(chǎn)生，主要存在于淋巴管中循環(huán)的淋巴液中，是機體免疫應(yīng)答功能的重要細胞成分，是淋巴系統(tǒng)幾乎全部免疫功能的主要執(zhí)行者，是對抗外界感染和監(jiān)控體內(nèi)細胞變異的一線“士兵"。淋巴細胞是一類具有免疫識別功能的細胞系，按其發(fā)生遷移、表面分子和功能的不同，可分為T淋巴細胞（又名T細胞）、B淋巴細胞（又名B細胞）和自然殺傷（NK）細胞。T細胞和B細胞都是抗原特異性淋巴細胞，它們的初來源是相同的，都來自造血組織。T淋巴細胞隨血循環(huán)到，在激素等的作用下成熟，而B細胞在骨髓中分化成熟。當受抗原刺激后，T淋巴細胞即轉(zhuǎn)化為淋巴母細胞，再分化為致敏T淋巴細胞，參與細胞免疫，其免疫功能主要是抗胞內(nèi)感染、瘤細胞與異體細胞等；而B淋巴細胞是先轉(zhuǎn)化為漿母細胞，再分化為漿細胞，產(chǎn)生并分泌免疫球蛋白（抗體），參與體液免疫，其功能是產(chǎn)生抗體，提呈抗原，以及分泌細胞內(nèi)因子參與免疫調(diào)節(jié)；NK細胞不依賴抗原刺激而自發(fā)地發(fā)揮細胞毒效應(yīng)，具有殺傷靶細胞的作用。

方法簡介：

公司實驗室分離的人外周血淋巴采用取外周血、通過密度梯度離心法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的人外周血淋巴經(jīng)過檢測，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 懸浮

細胞形態(tài) 圓形

傳代特性 不增殖；不傳代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠白細胞抗原DR(HLA-DR)檢測試劑盒 ，英文名： HLA-DR ELISA Kit

Lactamase inhibitors (BLI) ELISA Kit 小鼠β內(nèi)酰胺酶抑制劑(BLI)檢測試劑盒

ELISA 小鼠Foxp3(mouse Foxp3)  進口分裝

CLIAKitforirGH(HumanImmunoreactivegrowthhormone)ELISAKit人免疫反應(yīng)性生長激素

通用型(CO2)濃度酶偶聯(lián)反應(yīng)比色法定量檢測試劑盒50次

ELISAKitTNF-α大鼠腫瘤壞死因子α

HA重組甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

phospho-Smad2(p-Ser465 0.5mgphospho-Smad2(p-Ser465)petide 0酸化Smad2抗原

COCH重組人 Cochlin / COCH 蛋白 Protein

IL17RB Protein Human 重組人 IL17BR / IL17RB / IL-17 Receptor B 蛋白

CSF2 Protein Human 重組人 GM-CSF / CSF2 蛋白 (Fc 標簽)

phospho-Smad2(p-Ser465 0.5mgphospho-Smad2(p-Ser465)petide 0酸化Smad2抗原

IL17RB Protein Human 重組人 IL17BR / IL17RB / IL-17 Receptor B 蛋白

HA重組甲型流感 H7N9 (A/Shanghai/1/2013) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

CSF2 Protein Human 重組人 GM-CSF / CSF2 蛋白 (Fc 標簽)

COCH重組人 Cochlin / COCH 蛋白 Protein

豚鼠免疫球蛋白G(IgG)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human cytotoxin (CTX) ELISA Kit 人細胞毒素(CTX)檢測試劑盒

Humanai-cardiolipinaibodyIgG,ACA-IgGELISAKit 人抗心0脂抗體IgG(ACA-IgG)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

humanC-typelectindomainfamily4membere,CLEC4E檢測試劑盒人C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族4成員E(CLEC4E)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織EPHB2激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

HumanProinsulin,PIELISAKit人胰島素原(PI)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

人外周血淋巴細胞三0酸腺苷酶   英文名稱：   Rat Adenosine iphosphate   規(guī)格：      英文縮寫：   ATP

大鼠半胱天冬蛋白酶3   英文名稱：   active cysteine-aspaic acid protease-3   規(guī)格：      英文縮寫：   Active Caspase-3

大鼠半胱天冬蛋白酶7   英文名稱：   active cysteine-aspaic acid protease-7   規(guī)格：      英文縮寫：   Active Caspase-7

大鼠半胱天冬蛋白酶8   英文名稱：   active cysteine-aspaic acid protease-8   規(guī)格：      英文縮寫：   Active Caspase-8