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① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

產(chǎn)品名稱：小鼠腎實(shí)質(zhì)細(xì)胞

英文名稱：Mouse Renal Parenchymal Cells

組織來源：腎組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

小鼠腎實(shí)質(zhì)分離自腎組織；腎臟是機(jī)體的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物、毒物，同時(shí)經(jīng)重吸收功能保留水份及其他有用物質(zhì)，如葡萄糖、蛋白質(zhì)、氨基酸、鈉離子、鉀離子、等，以調(diào)節(jié)水、電解質(zhì)平衡及維護(hù)酸堿平衡。腎臟同時(shí)還有內(nèi)分泌功能，生成腎素、促紅細(xì)胞生成素、活性3、前列腺素、激肽等，又為機(jī)體部分內(nèi)分泌激素的降解場(chǎng)所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能，保證了機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，使新陳代謝得以正常進(jìn)行。腎臟移植是臨床上治療慢性腎功能衰竭的有效方法，然而這種方法受到供體腎短缺的限制。腎細(xì)胞移植可部分解決供體腎短缺的問題，是未來可以替代腎臟移植的有效方法。因此，體外腎細(xì)胞的培養(yǎng)受到國(guó)內(nèi)外有關(guān)專家的密切關(guān)注。原代腎細(xì)胞作為一種常用的腎臟毒理學(xué)研究對(duì)象，其分離方法主要有機(jī)械研磨分離法和酶消化法，酶消化法因?qū)?xì)胞損傷小、分離效果好而優(yōu)于機(jī)械研磨分離法；目前常用的酶消化法主要是消化法和膠原酶消化法。

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠腎實(shí)質(zhì)采用膠原酶-混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠腎實(shí)質(zhì)經(jīng)檢測(cè)，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動(dòng)物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應(yīng)嚴(yán)格無菌

③ 防止機(jī)械損傷

④ 去除無用組織和避免干燥

⑤ 應(yīng)注意組織類型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動(dòng)物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細(xì)胞結(jié)合緊密，不利于各個(gè)細(xì)胞在體外培養(yǎng)中生長(zhǎng)繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開，使細(xì)胞解離出來。

(1)懸浮細(xì)胞的分離方法

組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。

(2)實(shí)體組織材料的分離方法

對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機(jī)械分散法

特點(diǎn):簡(jiǎn)便、快速,但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊(或糊狀)，應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。

大鼠上皮性鈣黏附蛋白(CDHE)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： CDHE ELISA Kit

Mouse cardiac anscription factor GATA4 ELISA Kit 小鼠心肌轉(zhuǎn)錄因子GATA4 檢測(cè)試劑盒

RatSomatostatin,SSELISAKit 大鼠(SS)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHAMA(Humanaimousaibody)ELISA人抗鼠抗體

細(xì)胞半胱蛋白酶-6(CASPASE-6)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

RatVitaminA,VAELISAKit大鼠A(VA)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

KDR重組大鼠 VEGFR2 / Flk-1 / CD309 / KDR 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

Estradiol/BSA 雌二醇偶聯(lián)牛血清白蛋白 1mgEstradiol/BSA 雌二醇偶聯(lián)牛血清白蛋白

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GDNF Protein Human 重組人 GDNF 蛋白

TNFRSF1B Protein Mouse 重組小鼠 TNFR2 / CD120b / TNFRSF1B 蛋白

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小鼠白介素6(IL-6)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat heat shock protein 90 (HSP-90) ELISA Kit 大鼠熱休克蛋白90(HSP-90)檢測(cè)試劑盒

Humanierleukieceptorassociatedkinase,IRAKELISAKit 人白介素受體相關(guān)激酶(IRAK)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humancalmodulin,CAM檢測(cè)試劑盒人鈣調(diào)素(CAM)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

重組逆轉(zhuǎn)錄病毒感染試劑盒20次

HumanSolubleLectin-likeoxidizedlowdensitylipoproteieceptor-1,sLOX-1ELISAKit人可溶性凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體1(sLOX-1)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠腎實(shí)質(zhì)細(xì)胞兔子腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

兔子腦素/腦尿肽(BNP)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

兔子內(nèi)皮抑素(ES)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

兔子內(nèi)皮型合成酶3(eNOS-3)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。

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